试剂盒名称 | 江莱生物 Casp-3 ELISA试剂盒 | |
规格 | 48T/96T | |
品牌 | 江莱生物 | |
检测 | ELISA酶联免疫法 | |
检测波长 | 450nm | |
样本 | 、、细胞上清液等 | |
样本体积 | 50~100ul | |
研究X域 | 神经生物学、新陈代谢、免疫学等 | |
使用范围 | 仅用于科研实验 | |
保存 | 2~8℃,避光保存 |
江莱生物 Casp-3 ELISA试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个X对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及X孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF工作液50μl。
(5)酶标板置37℃箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以由容器上的划痕或指印等造成的光。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定。
江莱生物 Casp-3 ELISA试剂盒曲线计算
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江莱生物 Casp-3 ELISA试剂盒基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与中的其他分开。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定达到很高的度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。